Что значит обнаружено днк гепатита в (hbv dna)? Определение ДНК HBV методом ПЦР ДНК HBV обнаруживают методом полимеразной цепной реакции. Это значит, что с помощью амплификации в биологической жидкости обследуемого пациента участки ДНК вируса гепатита В синтезируются – их концентрация увеличивается в несколько раз. Каждый макро- и микроорганизм обладает уникальной неповторимой последовательностью нуклеотидов. Разработаны праймеры – так называемые эталоны, в сравнении с которыми устанавливается порядок нуклеотидов и идентифицируется микробный агент. Это значит, что практически исключена диагностическая ошибка. Ложноположительный и ложноотрицательный результаты встречаются крайне редко. Компания-производитель на упаковке с диагностической тест-системой всегда указывает значение (концентрацию вируса), которое расценивается как положительный результат. ПЦР-диагностика – быстрый метод диагностики. Результат известен через 2-3 часа от момента начала работы с биологической жидкостью пациента. Лаборатория выдает ответ на бланке, где указан не только сам результат (положительный или отрицательный, или же концентрация вирусных частиц), но и название тест-системы, а также ее чувствительность. Качественное исследование Качественное исследование ДНК вируса гепатита В предполагает только выявление этого микробного агента. Этот анализ назначается чаще, чем количественный, так как его диагностическая ценность несколько выше. Это исследование позволяет отличить норму от патологии, то есть получить однозначный ответ на вопрос, есть ли в крови обследуемого пациента возбудитель вирусного гепатита В или его нет. Чаще всего качественный анализ на ДНК вируса гепатита В необходим для диагностики хронической формы гепатита, когда клинические признаки этого варианта поражения печени минимальны. В диагностике острого вирусного гепатита В качественный анализ на ДНК необходим только в сложных диагностических случаях. Например, если в крови пациента уже не обнаруживается ни поверхностный антиген HBsAg, ни антитела anti-HBs. В такой ситуации вероятно затяжное течение болезни или трансформация острой формы в хроническую. Возникает необходимость назначения специфической мощной противовирусной терапии, поэтому необходимо оценить уровень репликации возбудителя гепатита В. Если это так называемое «серонегативное окно», то есть краткий период, когда отсутствует и антиген, и антитела, то противовирусная терапия не нужна. Если репликация вируса установлена, то это означает необходимость контроля за состоянием пациента и назначением противовирусной терапии. Количественное исследование Анализ концентрации ДНК вируса гепатита В необходим преимущественно в диагностике хронической формы болезни. В клинической практике количественный анализ называется чаще вирусной нагрузкой, так как исследуется количество вирионов вируса гепатита В в 1 мкл крови пациента. Читайте также: Гепатит в: симптомы и диагностика Обнаруженный уровень вирусной нагрузки до начала лечения является своеобразным эталоном. С изначальной цифрой сравнивается последующий результат, который назначается через месяц от начала специфической терапии и после завершения полного курса противовирусного лечения. Разновидности исследований методом ПЦР Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества: При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови. Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса. Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой. Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой. Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется: для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»; для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни; для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения. Исследование проводится при наличии таких показаний: гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела; при микст-гепатитах; если планируется проведение противовирусной терапии; во время и после лечения от гепатита С; при наличии хронического и острого гепатита С. Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см³ или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах. Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку. Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови. ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования. Читайте также: Когда анализ крови на hbsag может быть положительным? Результаты количественного анализа определение РНК вируса, представленные лабораторией, расшифровываются следующим образом: Другие виды диагностики при гепатите C Вирус гепатита С преимущественно поражает клетки печени, поэтому при его выявлении необходимо полноценное обследование этого органа. Вирусологические диагностика дополняется клиническим и биохимическими показателями (АЛТ, АСТ, общий и прямой билирубин, ГГТП, щелочная фосфотаза и прочие – список формирует лечащий врач). Этот набор анализов сдается регулярно: перед началом, раз в месяц во время и в течение года после лечения. Это необходимо для контроля состояния печени и ее реакции на терапию. Инструментальная диагностика, в первую очередь подразумевающая УЗИ органов брюшной полости с эластографией печени. Врач УЗ-диагностики в заключении описывает форму, размер, положение, структуру печени и желчного пузыря, а при помощи эластографии – стадию фиброза/цирроза печени. Дополнительно врач может назначить специальный тесты ФиброМакс или ФиброАктиТест. Это комплексный анализ крови, также необходимый для диагностики фиброза, стеатоза печени и активности разрушительных процессов. Независимо от того, беспокоят ли вас симптомы, гепатит С подлежит лечению. Без лечения со временем заболевание может привести к циррозу, раку печени и даже к летальному исходу. Тяжелая стадия цирроза может потребовать трансплантации печени. В клинике ЭКСПЕРТ вы получите полноценное и только необходимое обследование, развернутую консультацию врача и помощь на всех этапах лечения гепатита С. Правила подготовки к анализу Полимеразная цепная реакция не требует специальной подготовки. Правила подготовки такие же, как и к другим традиционным лабораторным исследованиям. Если у пациента возникают вопросы, то их необходимо задать лечащему доктору или сотруднику лабораторного комплекса. Перед определением ДНК HBV пациенту необходимо: на протяжении 3 дней отказаться от приема лекарственных препаратов; исключить жирную пищу; выдержать период голодания в течение 8-10 часов до момента взятия крови; запланировать визит в лабораторный комплекс на первую половину дня; приходить натощак, но обязательно выпить 1-2 стакана обычной питьевой воды или некрепкого чая. Допускается взятие крови пациента в одном подразделении и последующая доставка контейнера с биологическим материалом в лабораторный комплекс. Венозная кровь наливается в емкость с веществом, препятствующим свертыванию крови. Биологический материал в обязательном порядке транспортируется в лабораторный комплекс в условиях переносного холодильника (температура от 2 до 8 градусов). Информативный результат может быть получен только при условии доставки крови в течение 24 часов. В каких случаях делают количественный анализ Исследование делается параллельно с качественным анализом после того, как проверка крови на наличие антител к гепатиту (ИФА) показала положительный результат. Делают его несколько раз: Читайте также: Антитела к вирусу гепатита с При первичной диагностике гепатита С до принятия решения о выборе курса лечения; Во время лечения заболевания (обычно на 1, 4, 12 и 24 неделе) для определения клинической картины результатов терапии; После лечения для определения рецидива. Количественный анализ является одним из основных видов исследования, на которые врач полагается при выборе методов лечения гепатита. Он служит для того чтобы: Понять как сильно организм заражен вирусом, количественное присутствие антигенов в теле. Эффективности выбранной терапии. Подобрать метод лечения и составить его прогноз. Анализ крови, эластометрия, биопсия и другие. Как правило, его производят до начала излечения. Основными показаниями могут быть: Определение вирусной нагрузки и контроль за антивирусной терапией; Качественный ПЦР нашел антитела гепатита С; Нахождение острого и хронического гепатита С; Существование микст-гепатитов; При планировании лечения; Если качественное исследование еще находит присутствие болезни по прошествии двенадцатой недели терапии. Какие нужно сдавать анализы на гепатит В? Что это такое Как проходит исследование В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя. Амплификатор Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа. Расшифровка результата анализа ПРЦ на гепатит С При каждой лаборатории присутствует специально обученный сотрудник, занимающийся расшифровкой анализов. Именно в его компетенции находится выявление референсного значения. При этом каждая лаборатория использует различные реактивы и тест-системы. Именно поэтому количественный анализ может быть либо в МЕ/мл или копиях/мл. Но это не меняет сути. Лаборант не занимается трактовкой данных – это функция врача-гепатолога. Он рассматривает не только данные представленного обследования. Если результат вызывает сомнение, специалист может назначить дополнительное обследования при помощи других методик. Некоторые выводы больной может сделать самостоятельно, получив результаты на руки. Качественный тест с обозначением «обнаружено» или «не обнаружено» косвенно укажет на наличие заболевания. Трактовка количественного показателя – привилегия врача. Тем более что среди врачей не существует единого мнения, какая вирусная нагрузка является средней, а какая – низкой. Существуют такие значения: Читайте также: Основные анализы на гепатит с от 0 до 15МЕ/мл – референсное значение (то есть пациент скорее здоров, чем болен); до 4 х 10*5 МЕ/мл – низкая вирусная нагрузка; от 4 х 10*5 МЕ/мл до 8 х 10*5 МЕ/мл – средняя вирусная нагрузка; свыше 8 х 10*5 МЕ/мл до 10 х 10*5 МЕ/мл – высокая вирусная нагрузка; более 10 х 10*5 МЕ/мл – очень высокая нагрузка, сопряженная с опасностью для жизни пациента. Количественный показатель указывает на агрессивность вируса. То есть чем его больше, тем сильнее негативное воздействие, оказываемое им на печень, тем длительнее и сложение будет терапия. Если пациент сомневается в результатах анализов, их следует пересдать по собственной инициативе. Анализы ИФА на гепатит С Эта методика основывается на обнаружении в венозной крови пациента, антител к вирусному гепатиту С. Их существует два типа: IgG – указывает на хроническое течение заболевания; IgM – указывает, что болезнь находится в острой стадии. Отсутствие антител обозначает, что болезни нет. Но это не всегда верно. Вирус HVC умеет «скрываться» и «обманывать» иммунную систему человека. Поэтому при его попадании в организм не всегда тут же происходит адекватный иммунный ответ. Поэтому в случае сомнения анализ следует повторить через время. Анализы riba на гепатит С Не относится к первоначальному обследованию. Его чаще используют после ПРЦ или ИФА для подтверждения диагноза. RIBA обозначает рекомбинантный иммуноблотинг. Методика не позволяет точно определить генотип вируса, она указывает на его однозначное присутствие в организме. Биохимический анализ крови для выявления гепатита С Анализ крови на биохимические показатели – это важный этап предварительного обследования. Человеческая кровь выдает более 100 показателей. Их отклонение от референсного значения может указывать на следующие патологии: Нарушение работы печени, почек, поджелудочной железы или желчного пузыря. Сбой в обменных процессах. Воспалительные процессы внутренних органов, тканях или суставах. Биохимический анализ крови позволяет быстро выявить любые проблемы со здоровьем. Отклонение показателей от нормы точно указывает на возникшие заболевания и дает основание для дополнительных обследований. Для определения возможных проблем с печенью исследуется следующие показатели: Показатель Возможная патология Ед. измерения Референсное значение мужчины женщины Билирубин Превышение верхней допустимой границы указывает на серьезные нарушения в работе печени и ее структурное изменение Мкмоль/л 3,4-17,1 3,4-17,1 Альбумин белок, вырабатываемый печенью Резкое снижение показателя свидетельствует о серьезном заболевании печени г/л 35-50 35-50 Гамма-глобулин г/л 130-160 120-150 Ферменты АлАт и АсАт Любое отклонение выше верхнего референсного значения указывает на присутствие вирусного гепатита Ед/л 41-45 31 Глюкоза Понижение показателя обозначает серьезное нарушение метаболизма и отклонения в работе печени Ммоль/л 3,30-5,50 3,30-5,50 Показатели нормы различаются не только по половой принадлежности, но и в зависимости от возраста пациента. В таблице указаны данные для взрослых пациентов до 60 лет. Только врач способен расшифровать показатели. Некоторое отклонение от нормы не обязательно указывает на наличие гепатита С. Это может быть временный сбой в работе печени под воздействием других факторов. Показания к проведению исследования Необходимость выявить наличие ДНК HBV (или подтвердить ее отсутствие) целесообразно в таких ситуациях: длительное течение острой формы гепатита В (затяжной вариант с высокой вероятностью хронизации); при получении сомнительных результатов серологических маркеров (например, отрицательный HBsAg и положительный HBeAg); перед началом противовирусной терапии пациенту с хроническим гепатитом В для оценки концентрации вирусных частиц в крови (вирусная нагрузка); через месяц от момента старта противовирусной терапии для оценки эффективности назначенных противовирусных средств (вирусная нагрузка должна снижаться); после завершения курса специфического лечения для оценки его эффективности (качественный и количественный анализ ДНК HBV должны стать отрицательными). Семейный доктор также может назначить анализ на ДНК HBV в процессе проведения дифференциальной диагностики, если у пациента заподозрено заболевание печени или диагностирован синдром желтухи неустановленной этиологии. Кратность проведения анализов на ДНК HBV, какой именно вариант необходим (качественный или количественный) – решает лечащий доктор. Пациенту лучше не заниматься самодиагностикой, так как ПЦР-диагностика на ДНК HBV достаточно дорогая. Частые вопросы Какова суть анализа ПЦР на гепатит В? Анализ ПЦР на гепатит В основан на методе полимеразной цепной реакции (ПЦР), который позволяет обнаружить и определить наличие вируса гепатита В в организме пациента. Этот метод позволяет выявить наличие вирусной ДНК в крови и определить степень его активности. Какие результаты может показать анализ ПЦР на гепатит В? Результаты анализа ПЦР на гепатит В могут быть положительными, отрицательными или сомнительными. Положительный результат указывает на наличие вирусной ДНК в крови и подтверждает диагноз гепатита В. Отрицательный результат означает отсутствие вирусной ДНК и отсутствие активной инфекции. Сомнительный результат требует повторного исследования для подтверждения или опровержения наличия вируса. Какова важность анализа ПЦР на гепатит В? Анализ ПЦР на гепатит В является важным методом диагностики и контроля данного заболевания. Он позволяет выявить наличие вируса в организме, определить его активность и степень развития инфекции. Это позволяет врачам принять решение о необходимости лечения и выборе соответствующих препаратов. Кроме того, анализ ПЦР на гепатит В используется для оценки эффективности лечения и контроля за динамикой заболевания. Диагностика гепатита С Гепатит С – вирусное заболевание, проявляется поражением печени и аутоиммунными нарушениями, имеющее хроническое и скрытое течение. Инкубационный период – в среднем 2-6 недель. Протекает в желтушной (5%) или безжелтушной (95%) формах. Гепатиты С передаются с кровью и биологическими жидкостями, чаще встречается в группах риска. По сравнению с другими вирусными гепатитами, гепатит С имеет менее выраженную клиническую картину, чаще переходит в хронические формы. В 20 – 50% случаев хронический гепатит С приводит к циррозу печени. Анализы, если подозрение на гепатит С anti-HCV (суммарное IgM и IgG) – скрининговый тест для диагностики вирусного гепатита С. Anti-HCV выявляются в среднем с 4-6-й недели от момента инфицирования и могут обнаруживаться в течение 4-8 и более лет после выздоровления. ПОДГОТОВКА ПЕРЕД АНАЛИЗОМ. Сдать анализ на гепатит следует натощак, т.е. явиться для забора крови можно не менее, чем через 3 часа после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа. Если на планируете анонимную сдачу гепатита, не забудьте взять с собой паспорт Планируя провериться, обратите внимание, что целесообразно сдавать “тройку” – анализы на ВИЧ, гепатит и сифилис! Цена анализа крови на гепатиты Исследования Вид анализа Цена Цена, срочно Кровь на гепатит А anti-HAV IgG качественный 800 1 500 anti-HAV IgM качественный 1 000 2 000 Анализ на гепатит Б HBsAg качественный 950 1 750 anti-HBs количественный 800 1 500 anti-HBc IgM качественный 800 1 500 anti-HBc (суммарное) качественный 800 1 500 HBeAg качественный 800 1 500 anti-HBe качественный 800 1 500 HBsAg количественный 1500 – Диагностика гепатита С anti-HCV IgM качественный 950 anti-HCV (суммарное) качественный 950 – Гепатит Д anti-HDV IgM качественный 900 anti-HDV (суммарное) качественный 955 Гепатит Е anti-HEV IgМ качественный 900 anti-HEV IgG качественный 960 Комплексный анализ гепатит вич сифилис Исследования ИФА Цена ВИЧ (Anti-HIV 1,2/Ag p24) качественный 950 Гепатит В (HBs австралийский антиген) качественный 950 Гепатит С (антитела IgM anti-HCV) качественный 950 Сифилис (RW, реакция Вассермана) качественный 950 Анализы на ВИЧ и гепатит ПЦР Цена качественный 3 950 Стоимость взятия крови из вены – 550 рублей. Анонимный анализ на гепатит в Москве не сдают в случаях: при госпитализации в стационар, при проведении некоторых процедур, в органах Федеральной миграционной службы России, при устройстве на работу определенных категорий граждан, в посольствах и представительствах республик. ГДЕ СДАТЬ АНАЛИЗ НА ГЕПАТИТ Мы на карте Что такое ПЦР Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением. В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов: Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV). Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков. По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.). Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови. Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл. При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл. Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови. Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении. Виды исследования Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C. Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего): Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV. Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР. Интерпретация данных Интерпретировать данные качественного измерения несложно. Он дает либо положительный, либо отрицательный ответ. При количественной реакции оценить полученные показатели можно в зависимости от числа копий ДНК. Единицей измерения является копий/мл. Расшифровываются данные следующим образом: Если количество ДНК ВГВ менее 90, то инфекция отсутствует. У пациента развился поствакцинальный иммунитет, либо он излечился от болезни. При числе копий 2х100 говорят о носительстве вируса. Количество 2х106 свидетельствует о хронической стадии болезни. При ДНК более 2х109 пациент болен острой стадией гепатита. Суть ПЦР метода Американский химик К.Муллис получил Нобелевскую премию, и до сих пор применяется его метод диагностики Родоначальником метода ПЦР (полимеразной цепной реакции) считается ученый из Норвегии Х. Клеппе. Он первый стал проводить амплификацию (восстановление) ДНК при помощи короткой цепочки ДНК, то есть синтетического праймера (своеобразной копии). Однако, ученому не удалось реализовать свою идею. Похожие исследования сделал американский химик К.Муллис, который в 1993 был удостоен Нобелевской премии за свое изобретение. С тех пор ПЦР используют для установления отцовства, диагностики генетических болезней, обнаружения вирусов. Суть реакции в том, что при помощи ферментов копируется определенный участок ДНК. Скопировать можно только участок, который соответствует заданным параметрам и если он есть в представленном образце. Для запуска реакции применяют следующие компоненты: Матричная ДНК с участком, подлежащим копированию. Праймеры, схожие по строению участку ДНК. Полимераза, то есть фермент, запускающий реакцию. Она должна быть термостабильной, то есть выдерживать перепады температур. Раствор с определенными параметрами, обеспечивающий прохождение реакции. Реакция проводится в несколько этапов: Денатурация (прогревание) Сначала раствор нагревают, в результате чего цепочки ДНК расходятся. Стадия отжига Раствор остужают, праймеры связываются с одноцепочечной матрицей. Этап элонгации Полимераза создает дочернюю цепь ДНК, достраиваются все фрагменты цепочки. Цепочка может расти до пределов, которые задаются количеством реагентов, затем достигает состояния плато. Для обнаружения гепатита в применяют два типа реакции: количественную и качественную. Количественный ПЦР Количественный метод определяет количество генома ВГВ Количественный ПЦР предполагает одновременное создание копий фрагментов ДНК и определение количества молекул. Измерение проводится после каждого этапа, то есть в режиме реального времени. Это достигается при помощи флюоресцентных зондов, которые включаются в цепочку молекул и светятся в определенный период исследования. Данный способ применяют для обнаружения фрагментов ДНК, которые являются маркерами вируса гепатита. С помощью количественного метода удается точно выделить генотип вируса. Другими словами, подсчитывают количество копий генома ВГВ на количество клеток больного. Количественный анализ дает ответы на следующие вопросы: С какой интенсивностью прогрессирует болезнь. Насколько эффективно проводимое лечение. Развилась ли резистентность к назначенным препаратам. Также количественное измерение необходимо для диагностики хронической стадии инфекции. Если количество ДНК ниже 100 шт/мл при нормальном уровне трансаминаза, то человек является носителем вируса. При острой фазе количество антител значительно выше.При антивирусной терапии повышение количества антител свидетельствует о развившейся устойчивости к лекарствам, это является сигналом для корректировки лечения. Качественный ПЦР Качественный ПЦР дает меньше информации, однако может исключить заражение Качественный ПЦР позволяет только установить присутствие возбудителя в крови. Если они отсутствуют, то пациент не заражен, при попадании возбудителя в кровь результат будет положительным. Однако, с помощью качественной реакции невозможно уточнить геном вируса, этап заболевания. Поэтому для диагностики ВГВ проводят как количественное, так и качественное измерение. Типы и квазитипы гепатита С Вирусы — живые микроорганизмы. У них неклеточная структура, но набор генов имеется. Набор этот индивидуален для каждого из вирусов. Поэтому патогены и оказывают разное воздействие на организм. Однако различия в геноме могут быть минимальны, как в случае с подтипами возбудителя гепатита С. Определение генотипа вируса гепатита С может дать несколько результатов. Учёные насчитывают 11 разновидностей патогена. Не все из них признаны Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ). Согласно её классификации различают 6 генотипов: Первый. Если задать вопрос, какой генотип гепатита С самый опасный, врачи укажут именно его. Штамм вируса первого типа легко приспосабливается к изменяющейся среде, лечению. Из-за этого терапия затруднена. Первый генотип имеет 3 разновидности – a, b и c. Вторая из них считается наиболее опасной. У людей с диагнозом гепатит С 1b в 60% случаев болезнь перетекает в хроническую форму. Второй генотип. Гепатит С этого типа встречается реже первого и отличается «щадящим» режимом. Вирусная нагрузка на печень и организм в целом минимальная, воспалительные процессы протекают неактивно. Выздоравливают примерно 90% заразившихся. Подтипов второго генотипа тоже 3. Третий. Является ответом на вопрос, какой генотип гепатита С лучше поддаётся лечению. Отчасти это связано с изученностью патогенна, широким спектром лекарств против него. В случае правильного подбора медикаментов полное выздоровление наступает уже через 24 недели. Генотип обладает двумя квазитипами — а и в. Четвёртый, пятый и шестой генотипы. Объединены в одном пункте, поскольку мало изучены. Соответственно, над схемами терапии ещё работают. Четвёртый генотип обладает сразу девятью подтипами. Это a, b, c, d, e, f, h, i, j. Пятый и шестой имеют только по одному квазитипу а. Вирус гепатита С обнаружен в конце 1980-х годов. Поэтому выявление генотипов продолжается. Как уже отмечалось выше, учёные указывают на 11 разновидностей. Возможно, со временем и Всемирная Организация Здравоохранения внесёт их в классификатор. Появление новых типов тоже не исключено. Ошибочные результаты Преимущества метода диагностики с помощью полимеразных реакцийи заключаются в следующем: Прямое обнаружение возбудителей. В отличие от него, метод ИФА дает информацию о присутствии антител к вирусу. Специфичность. То есть копируется именно участок ДНК, который имеется в образце биоматериала. Повышенная чувствительность. Метод может обнаружить даже единичные фрагменты клеток. Диагностика болезней в острой и в скрытой стадии. То есть, можно диагностировать болезнь на этапе доклинических проявлений. У метода есть недостатки, которые приводят к ложным результатам. Самый существенный недостаток — вероятность загрязнения материала. Основным источником загрязнения являются плохо обработанные пробирки, руки лаборанта, реактивы. В кровь может попасть часть ДНК от предыдущей реакции. Поэтому к лабораториям предъявляются повышенные санитарные требования: раздельные помещения, пластиковые пробирки, обработка лабораторий ультрафиолетом и т. д. Ложноотрицательные результаты могут быть следствием сниженной чувствительности реакции. Это происходит в следующих ситуациях: пациент принимает лекарственные препараты, например, антикоагулянты; человек перед анализом перенес физическое напряжение (занятия спортом, тяжелая работа); заражение произошло недавно. Если у пациента есть высокая вероятность инфицирования, а результат исследования отрицательный, ему необходимо повторное обследование. Показания к назначению Частые вопросы Какие анализы нужно сдать для расшифровки наличия гепатита В? Для расшифровки наличия гепатита В необходимо сдать анализы на наличие антигена HbsAg и антител к гепатиту В (анти-HBc IgM, анти-HBc IgG, анти-HBs). Какие значения анализов указывают на наличие гепатита В? Положительный результат анализа на антиген HbsAg и наличие антител IgM к гепатиту В указывают на активную фазу заболевания. Положительный результат анализа на антиген HbsAg и наличие антител IgG к гепатиту В указывают на хроническую форму заболевания. Положительный результат анализа на антитела IgG к гепатиту В без наличия антигена HbsAg указывает на ранее перенесенное заболевание или наличие иммунитета к гепатиту В. Какие анализы помогут определить степень активности гепатита В? Для определения степени активности гепатита В проводят анализы на уровень аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ). Повышенные значения этих ферментов могут указывать на активность воспалительного процесса в печени. Анализ на гепатит Б HBsAg – поверхностный (“австралийский”) антиген вируса гепатита В, основной маркёр острого и хронического процесса. Сдается для первичной диагностики заболевания, по желанию – анонимно, а также в комплексе с анализами на ВИЧ и сифилис. В большинстве случаев HBsAg обнаруживается уже в инкубационном периоде и при остром течении гепатита выявляется в крови в течение 5 – 6 месяцев. Обнаружение поверхностного антигена вируса гепатита В в крови дольше 6 месяцев после начала болезни свидетельствует о возможной хронизации процесса. HBsAg не выявляется при латентных формах. Для уточнения фазы хронического гепатита В проводится определение других маркеров инфекции (ДНК методом ПЦР, HBeAg, анти-HBeAg). Антитела к поверхностному антигену вирусного гепатита Б (Anti-HBs), качественный анализ. Показатель перенесенного гепатита В или иммунитета после вакцинации. После перенесенного острого гепатита В anti-HBs начинают определяться в крови через 2-6 недель после исчезновения HBsAg. Эти антитела являются маркером выздоровления и в большинстве случаев сохраняются пожизненно. Сдать анализ рекомендуется перед проведением вакцинации (в комплексе с определением HBsAg). Антитела к поверхностному антигену вирусного гепатита Б (Anti-HBs), количественный анализ – маркер перенесенного гепатита В или поствакцинального иммунитета. Количественное определение антител к автсралийскому антигену используется для оценки эффективности проведенной вакцинации.ЧТО ОЗНАЧАЮТ РЕЗУЛЬТАТЫ Результат аnti-HBs Интерпретация Рекомендации менее 10 мМЕ/мл Антитела не обнаружены рекомендуется вакцинация/ревакцинация 10-100 мМЕ/мл Низкая концентрация антител пересдача анализа каждые 3-6 месяцев более 100 мМЕ/мл Антитела обнаружены вакцинация рекомендуется не ранее, чем через 8-10 лет HBsAg, количественный анализ – дополнительный критерий для выявления хронического гепатита В и неактивного носительства, а также для оценки эффективности противовирусной терапии. HBeAg – показатель активного размножения вируса. Диагностируется в крови после появления HBsAg. При хроническом HBeAg-позитивном гепатите персистирует в крови длительное время. Этот анализ проводится лицам с положительным результатом определения HBsAg и для оценки эффективности противовирусной терапии.
Что значит обнаружено днк гепатита в (hbv dna)? Определение ДНК HBV методом ПЦР ДНК HBV обнаруживают методом полимеразной цепной реакции. Это значит, что с помощью амплификации в биологической жидкости обследуемого пациента участки ДНК вируса гепатита В синтезируются – их концентрация увеличивается в несколько раз. Каждый макро- и микроорганизм обладает уникальной неповторимой последовательностью нуклеотидов. Разработаны праймеры – так называемые эталоны, в сравнении с которыми устанавливается порядок нуклеотидов и идентифицируется микробный агент. Это значит, что практически исключена диагностическая ошибка. Ложноположительный и ложноотрицательный результаты встречаются крайне редко. Компания-производитель на упаковке с диагностической тест-системой всегда указывает значение (концентрацию вируса), которое расценивается как положительный результат. ПЦР-диагностика – быстрый метод диагностики. Результат известен через 2-3 часа от момента начала работы с биологической жидкостью пациента. Лаборатория выдает ответ на бланке, где указан не только сам результат (положительный или отрицательный, или же концентрация вирусных частиц), но и название тест-системы, а также ее чувствительность. Качественное исследование Качественное исследование ДНК вируса гепатита В предполагает только выявление этого микробного агента. Этот анализ назначается чаще, чем количественный, так как его диагностическая ценность несколько выше. Это исследование позволяет отличить норму от патологии, то есть получить однозначный ответ на вопрос, есть ли в крови обследуемого пациента возбудитель вирусного гепатита В или его нет. Чаще всего качественный анализ на ДНК вируса гепатита В необходим для диагностики хронической формы гепатита, когда клинические признаки этого варианта поражения печени минимальны. В диагностике острого вирусного гепатита В качественный анализ на ДНК необходим только в сложных диагностических случаях. Например, если в крови пациента уже не обнаруживается ни поверхностный антиген HBsAg, ни антитела anti-HBs. В такой ситуации вероятно затяжное течение болезни или трансформация острой формы в хроническую. Возникает необходимость назначения специфической мощной противовирусной терапии, поэтому необходимо оценить уровень репликации возбудителя гепатита В. Если это так называемое «серонегативное окно», то есть краткий период, когда отсутствует и антиген, и антитела, то противовирусная терапия не нужна. Если репликация вируса установлена, то это означает необходимость контроля за состоянием пациента и назначением противовирусной терапии. Количественное исследование Анализ концентрации ДНК вируса гепатита В необходим преимущественно в диагностике хронической формы болезни. В клинической практике количественный анализ называется чаще вирусной нагрузкой, так как исследуется количество вирионов вируса гепатита В в 1 мкл крови пациента. Читайте также: Гепатит в: симптомы и диагностика Обнаруженный уровень вирусной нагрузки до начала лечения является своеобразным эталоном. С изначальной цифрой сравнивается последующий результат, который назначается через месяц от начала специфической терапии и после завершения полного курса противовирусного лечения. Разновидности исследований методом ПЦР Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества: При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови. Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса. Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой. Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой. Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется: для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»; для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни; для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения. Исследование проводится при наличии таких показаний: гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела; при микст-гепатитах; если планируется проведение противовирусной терапии; во время и после лечения от гепатита С; при наличии хронического и острого гепатита С. Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см³ или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах. Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку. Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови. ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования. Читайте также: Когда анализ крови на hbsag может быть положительным? Результаты количественного анализа определение РНК вируса, представленные лабораторией, расшифровываются следующим образом: Другие виды диагностики при гепатите C Вирус гепатита С преимущественно поражает клетки печени, поэтому при его выявлении необходимо полноценное обследование этого органа. Вирусологические диагностика дополняется клиническим и биохимическими показателями (АЛТ, АСТ, общий и прямой билирубин, ГГТП, щелочная фосфотаза и прочие – список формирует лечащий врач). Этот набор анализов сдается регулярно: перед началом, раз в месяц во время и в течение года после лечения. Это необходимо для контроля состояния печени и ее реакции на терапию. Инструментальная диагностика, в первую очередь подразумевающая УЗИ органов брюшной полости с эластографией печени. Врач УЗ-диагностики в заключении описывает форму, размер, положение, структуру печени и желчного пузыря, а при помощи эластографии – стадию фиброза/цирроза печени. Дополнительно врач может назначить специальный тесты ФиброМакс или ФиброАктиТест. Это комплексный анализ крови, также необходимый для диагностики фиброза, стеатоза печени и активности разрушительных процессов. Независимо от того, беспокоят ли вас симптомы, гепатит С подлежит лечению. Без лечения со временем заболевание может привести к циррозу, раку печени и даже к летальному исходу. Тяжелая стадия цирроза может потребовать трансплантации печени. В клинике ЭКСПЕРТ вы получите полноценное и только необходимое обследование, развернутую консультацию врача и помощь на всех этапах лечения гепатита С. Правила подготовки к анализу Полимеразная цепная реакция не требует специальной подготовки. Правила подготовки такие же, как и к другим традиционным лабораторным исследованиям. Если у пациента возникают вопросы, то их необходимо задать лечащему доктору или сотруднику лабораторного комплекса. Перед определением ДНК HBV пациенту необходимо: на протяжении 3 дней отказаться от приема лекарственных препаратов; исключить жирную пищу; выдержать период голодания в течение 8-10 часов до момента взятия крови; запланировать визит в лабораторный комплекс на первую половину дня; приходить натощак, но обязательно выпить 1-2 стакана обычной питьевой воды или некрепкого чая. Допускается взятие крови пациента в одном подразделении и последующая доставка контейнера с биологическим материалом в лабораторный комплекс. Венозная кровь наливается в емкость с веществом, препятствующим свертыванию крови. Биологический материал в обязательном порядке транспортируется в лабораторный комплекс в условиях переносного холодильника (температура от 2 до 8 градусов). Информативный результат может быть получен только при условии доставки крови в течение 24 часов. В каких случаях делают количественный анализ Исследование делается параллельно с качественным анализом после того, как проверка крови на наличие антител к гепатиту (ИФА) показала положительный результат. Делают его несколько раз: Читайте также: Антитела к вирусу гепатита с При первичной диагностике гепатита С до принятия решения о выборе курса лечения; Во время лечения заболевания (обычно на 1, 4, 12 и 24 неделе) для определения клинической картины результатов терапии; После лечения для определения рецидива. Количественный анализ является одним из основных видов исследования, на которые врач полагается при выборе методов лечения гепатита. Он служит для того чтобы: Понять как сильно организм заражен вирусом, количественное присутствие антигенов в теле. Эффективности выбранной терапии. Подобрать метод лечения и составить его прогноз. Анализ крови, эластометрия, биопсия и другие. Как правило, его производят до начала излечения. Основными показаниями могут быть: Определение вирусной нагрузки и контроль за антивирусной терапией; Качественный ПЦР нашел антитела гепатита С; Нахождение острого и хронического гепатита С; Существование микст-гепатитов; При планировании лечения; Если качественное исследование еще находит присутствие болезни по прошествии двенадцатой недели терапии. Какие нужно сдавать анализы на гепатит В? Что это такое Как проходит исследование В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя. Амплификатор Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа. Расшифровка результата анализа ПРЦ на гепатит С При каждой лаборатории присутствует специально обученный сотрудник, занимающийся расшифровкой анализов. Именно в его компетенции находится выявление референсного значения. При этом каждая лаборатория использует различные реактивы и тест-системы. Именно поэтому количественный анализ может быть либо в МЕ/мл или копиях/мл. Но это не меняет сути. Лаборант не занимается трактовкой данных – это функция врача-гепатолога. Он рассматривает не только данные представленного обследования. Если результат вызывает сомнение, специалист может назначить дополнительное обследования при помощи других методик. Некоторые выводы больной может сделать самостоятельно, получив результаты на руки. Качественный тест с обозначением «обнаружено» или «не обнаружено» косвенно укажет на наличие заболевания. Трактовка количественного показателя – привилегия врача. Тем более что среди врачей не существует единого мнения, какая вирусная нагрузка является средней, а какая – низкой. Существуют такие значения: Читайте также: Основные анализы на гепатит с от 0 до 15МЕ/мл – референсное значение (то есть пациент скорее здоров, чем болен); до 4 х 10*5 МЕ/мл – низкая вирусная нагрузка; от 4 х 10*5 МЕ/мл до 8 х 10*5 МЕ/мл – средняя вирусная нагрузка; свыше 8 х 10*5 МЕ/мл до 10 х 10*5 МЕ/мл – высокая вирусная нагрузка; более 10 х 10*5 МЕ/мл – очень высокая нагрузка, сопряженная с опасностью для жизни пациента. Количественный показатель указывает на агрессивность вируса. То есть чем его больше, тем сильнее негативное воздействие, оказываемое им на печень, тем длительнее и сложение будет терапия. Если пациент сомневается в результатах анализов, их следует пересдать по собственной инициативе. Анализы ИФА на гепатит С Эта методика основывается на обнаружении в венозной крови пациента, антител к вирусному гепатиту С. Их существует два типа: IgG – указывает на хроническое течение заболевания; IgM – указывает, что болезнь находится в острой стадии. Отсутствие антител обозначает, что болезни нет. Но это не всегда верно. Вирус HVC умеет «скрываться» и «обманывать» иммунную систему человека. Поэтому при его попадании в организм не всегда тут же происходит адекватный иммунный ответ. Поэтому в случае сомнения анализ следует повторить через время. Анализы riba на гепатит С Не относится к первоначальному обследованию. Его чаще используют после ПРЦ или ИФА для подтверждения диагноза. RIBA обозначает рекомбинантный иммуноблотинг. Методика не позволяет точно определить генотип вируса, она указывает на его однозначное присутствие в организме. Биохимический анализ крови для выявления гепатита С Анализ крови на биохимические показатели – это важный этап предварительного обследования. Человеческая кровь выдает более 100 показателей. Их отклонение от референсного значения может указывать на следующие патологии: Нарушение работы печени, почек, поджелудочной железы или желчного пузыря. Сбой в обменных процессах. Воспалительные процессы внутренних органов, тканях или суставах. Биохимический анализ крови позволяет быстро выявить любые проблемы со здоровьем. Отклонение показателей от нормы точно указывает на возникшие заболевания и дает основание для дополнительных обследований. Для определения возможных проблем с печенью исследуется следующие показатели: Показатель Возможная патология Ед. измерения Референсное значение мужчины женщины Билирубин Превышение верхней допустимой границы указывает на серьезные нарушения в работе печени и ее структурное изменение Мкмоль/л 3,4-17,1 3,4-17,1 Альбумин белок, вырабатываемый печенью Резкое снижение показателя свидетельствует о серьезном заболевании печени г/л 35-50 35-50 Гамма-глобулин г/л 130-160 120-150 Ферменты АлАт и АсАт Любое отклонение выше верхнего референсного значения указывает на присутствие вирусного гепатита Ед/л 41-45 31 Глюкоза Понижение показателя обозначает серьезное нарушение метаболизма и отклонения в работе печени Ммоль/л 3,30-5,50 3,30-5,50 Показатели нормы различаются не только по половой принадлежности, но и в зависимости от возраста пациента. В таблице указаны данные для взрослых пациентов до 60 лет. Только врач способен расшифровать показатели. Некоторое отклонение от нормы не обязательно указывает на наличие гепатита С. Это может быть временный сбой в работе печени под воздействием других факторов. Показания к проведению исследования Необходимость выявить наличие ДНК HBV (или подтвердить ее отсутствие) целесообразно в таких ситуациях: длительное течение острой формы гепатита В (затяжной вариант с высокой вероятностью хронизации); при получении сомнительных результатов серологических маркеров (например, отрицательный HBsAg и положительный HBeAg); перед началом противовирусной терапии пациенту с хроническим гепатитом В для оценки концентрации вирусных частиц в крови (вирусная нагрузка); через месяц от момента старта противовирусной терапии для оценки эффективности назначенных противовирусных средств (вирусная нагрузка должна снижаться); после завершения курса специфического лечения для оценки его эффективности (качественный и количественный анализ ДНК HBV должны стать отрицательными). Семейный доктор также может назначить анализ на ДНК HBV в процессе проведения дифференциальной диагностики, если у пациента заподозрено заболевание печени или диагностирован синдром желтухи неустановленной этиологии. Кратность проведения анализов на ДНК HBV, какой именно вариант необходим (качественный или количественный) – решает лечащий доктор. Пациенту лучше не заниматься самодиагностикой, так как ПЦР-диагностика на ДНК HBV достаточно дорогая. Частые вопросы Какова суть анализа ПЦР на гепатит В? Анализ ПЦР на гепатит В основан на методе полимеразной цепной реакции (ПЦР), который позволяет обнаружить и определить наличие вируса гепатита В в организме пациента. Этот метод позволяет выявить наличие вирусной ДНК в крови и определить степень его активности. Какие результаты может показать анализ ПЦР на гепатит В? Результаты анализа ПЦР на гепатит В могут быть положительными, отрицательными или сомнительными. Положительный результат указывает на наличие вирусной ДНК в крови и подтверждает диагноз гепатита В. Отрицательный результат означает отсутствие вирусной ДНК и отсутствие активной инфекции. Сомнительный результат требует повторного исследования для подтверждения или опровержения наличия вируса. Какова важность анализа ПЦР на гепатит В? Анализ ПЦР на гепатит В является важным методом диагностики и контроля данного заболевания. Он позволяет выявить наличие вируса в организме, определить его активность и степень развития инфекции. Это позволяет врачам принять решение о необходимости лечения и выборе соответствующих препаратов. Кроме того, анализ ПЦР на гепатит В используется для оценки эффективности лечения и контроля за динамикой заболевания. Диагностика гепатита С Гепатит С – вирусное заболевание, проявляется поражением печени и аутоиммунными нарушениями, имеющее хроническое и скрытое течение. Инкубационный период – в среднем 2-6 недель. Протекает в желтушной (5%) или безжелтушной (95%) формах. Гепатиты С передаются с кровью и биологическими жидкостями, чаще встречается в группах риска. По сравнению с другими вирусными гепатитами, гепатит С имеет менее выраженную клиническую картину, чаще переходит в хронические формы. В 20 – 50% случаев хронический гепатит С приводит к циррозу печени. Анализы, если подозрение на гепатит С anti-HCV (суммарное IgM и IgG) – скрининговый тест для диагностики вирусного гепатита С. Anti-HCV выявляются в среднем с 4-6-й недели от момента инфицирования и могут обнаруживаться в течение 4-8 и более лет после выздоровления. ПОДГОТОВКА ПЕРЕД АНАЛИЗОМ. Сдать анализ на гепатит следует натощак, т.е. явиться для забора крови можно не менее, чем через 3 часа после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа. Если на планируете анонимную сдачу гепатита, не забудьте взять с собой паспорт Планируя провериться, обратите внимание, что целесообразно сдавать “тройку” – анализы на ВИЧ, гепатит и сифилис! Цена анализа крови на гепатиты Исследования Вид анализа Цена Цена, срочно Кровь на гепатит А anti-HAV IgG качественный 800 1 500 anti-HAV IgM качественный 1 000 2 000 Анализ на гепатит Б HBsAg качественный 950 1 750 anti-HBs количественный 800 1 500 anti-HBc IgM качественный 800 1 500 anti-HBc (суммарное) качественный 800 1 500 HBeAg качественный 800 1 500 anti-HBe качественный 800 1 500 HBsAg количественный 1500 – Диагностика гепатита С anti-HCV IgM качественный 950 anti-HCV (суммарное) качественный 950 – Гепатит Д anti-HDV IgM качественный 900 anti-HDV (суммарное) качественный 955 Гепатит Е anti-HEV IgМ качественный 900 anti-HEV IgG качественный 960 Комплексный анализ гепатит вич сифилис Исследования ИФА Цена ВИЧ (Anti-HIV 1,2/Ag p24) качественный 950 Гепатит В (HBs австралийский антиген) качественный 950 Гепатит С (антитела IgM anti-HCV) качественный 950 Сифилис (RW, реакция Вассермана) качественный 950 Анализы на ВИЧ и гепатит ПЦР Цена качественный 3 950 Стоимость взятия крови из вены – 550 рублей. Анонимный анализ на гепатит в Москве не сдают в случаях: при госпитализации в стационар, при проведении некоторых процедур, в органах Федеральной миграционной службы России, при устройстве на работу определенных категорий граждан, в посольствах и представительствах республик. ГДЕ СДАТЬ АНАЛИЗ НА ГЕПАТИТ Мы на карте Что такое ПЦР Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением. В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов: Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV). Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков. По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.). Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови. Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл. При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл. Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови. Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении. Виды исследования Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C. Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего): Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV. Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР. Интерпретация данных Интерпретировать данные качественного измерения несложно. Он дает либо положительный, либо отрицательный ответ. При количественной реакции оценить полученные показатели можно в зависимости от числа копий ДНК. Единицей измерения является копий/мл. Расшифровываются данные следующим образом: Если количество ДНК ВГВ менее 90, то инфекция отсутствует. У пациента развился поствакцинальный иммунитет, либо он излечился от болезни. При числе копий 2х100 говорят о носительстве вируса. Количество 2х106 свидетельствует о хронической стадии болезни. При ДНК более 2х109 пациент болен острой стадией гепатита. Суть ПЦР метода Американский химик К.Муллис получил Нобелевскую премию, и до сих пор применяется его метод диагностики Родоначальником метода ПЦР (полимеразной цепной реакции) считается ученый из Норвегии Х. Клеппе. Он первый стал проводить амплификацию (восстановление) ДНК при помощи короткой цепочки ДНК, то есть синтетического праймера (своеобразной копии). Однако, ученому не удалось реализовать свою идею. Похожие исследования сделал американский химик К.Муллис, который в 1993 был удостоен Нобелевской премии за свое изобретение. С тех пор ПЦР используют для установления отцовства, диагностики генетических болезней, обнаружения вирусов. Суть реакции в том, что при помощи ферментов копируется определенный участок ДНК. Скопировать можно только участок, который соответствует заданным параметрам и если он есть в представленном образце. Для запуска реакции применяют следующие компоненты: Матричная ДНК с участком, подлежащим копированию. Праймеры, схожие по строению участку ДНК. Полимераза, то есть фермент, запускающий реакцию. Она должна быть термостабильной, то есть выдерживать перепады температур. Раствор с определенными параметрами, обеспечивающий прохождение реакции. Реакция проводится в несколько этапов: Денатурация (прогревание) Сначала раствор нагревают, в результате чего цепочки ДНК расходятся. Стадия отжига Раствор остужают, праймеры связываются с одноцепочечной матрицей. Этап элонгации Полимераза создает дочернюю цепь ДНК, достраиваются все фрагменты цепочки. Цепочка может расти до пределов, которые задаются количеством реагентов, затем достигает состояния плато. Для обнаружения гепатита в применяют два типа реакции: количественную и качественную. Количественный ПЦР Количественный метод определяет количество генома ВГВ Количественный ПЦР предполагает одновременное создание копий фрагментов ДНК и определение количества молекул. Измерение проводится после каждого этапа, то есть в режиме реального времени. Это достигается при помощи флюоресцентных зондов, которые включаются в цепочку молекул и светятся в определенный период исследования. Данный способ применяют для обнаружения фрагментов ДНК, которые являются маркерами вируса гепатита. С помощью количественного метода удается точно выделить генотип вируса. Другими словами, подсчитывают количество копий генома ВГВ на количество клеток больного. Количественный анализ дает ответы на следующие вопросы: С какой интенсивностью прогрессирует болезнь. Насколько эффективно проводимое лечение. Развилась ли резистентность к назначенным препаратам. Также количественное измерение необходимо для диагностики хронической стадии инфекции. Если количество ДНК ниже 100 шт/мл при нормальном уровне трансаминаза, то человек является носителем вируса. При острой фазе количество антител значительно выше.При антивирусной терапии повышение количества антител свидетельствует о развившейся устойчивости к лекарствам, это является сигналом для корректировки лечения. Качественный ПЦР Качественный ПЦР дает меньше информации, однако может исключить заражение Качественный ПЦР позволяет только установить присутствие возбудителя в крови. Если они отсутствуют, то пациент не заражен, при попадании возбудителя в кровь результат будет положительным. Однако, с помощью качественной реакции невозможно уточнить геном вируса, этап заболевания. Поэтому для диагностики ВГВ проводят как количественное, так и качественное измерение. Типы и квазитипы гепатита С Вирусы — живые микроорганизмы. У них неклеточная структура, но набор генов имеется. Набор этот индивидуален для каждого из вирусов. Поэтому патогены и оказывают разное воздействие на организм. Однако различия в геноме могут быть минимальны, как в случае с подтипами возбудителя гепатита С. Определение генотипа вируса гепатита С может дать несколько результатов. Учёные насчитывают 11 разновидностей патогена. Не все из них признаны Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ). Согласно её классификации различают 6 генотипов: Первый. Если задать вопрос, какой генотип гепатита С самый опасный, врачи укажут именно его. Штамм вируса первого типа легко приспосабливается к изменяющейся среде, лечению. Из-за этого терапия затруднена. Первый генотип имеет 3 разновидности – a, b и c. Вторая из них считается наиболее опасной. У людей с диагнозом гепатит С 1b в 60% случаев болезнь перетекает в хроническую форму. Второй генотип. Гепатит С этого типа встречается реже первого и отличается «щадящим» режимом. Вирусная нагрузка на печень и организм в целом минимальная, воспалительные процессы протекают неактивно. Выздоравливают примерно 90% заразившихся. Подтипов второго генотипа тоже 3. Третий. Является ответом на вопрос, какой генотип гепатита С лучше поддаётся лечению. Отчасти это связано с изученностью патогенна, широким спектром лекарств против него. В случае правильного подбора медикаментов полное выздоровление наступает уже через 24 недели. Генотип обладает двумя квазитипами — а и в. Четвёртый, пятый и шестой генотипы. Объединены в одном пункте, поскольку мало изучены. Соответственно, над схемами терапии ещё работают. Четвёртый генотип обладает сразу девятью подтипами. Это a, b, c, d, e, f, h, i, j. Пятый и шестой имеют только по одному квазитипу а. Вирус гепатита С обнаружен в конце 1980-х годов. Поэтому выявление генотипов продолжается. Как уже отмечалось выше, учёные указывают на 11 разновидностей. Возможно, со временем и Всемирная Организация Здравоохранения внесёт их в классификатор. Появление новых типов тоже не исключено. Ошибочные результаты Преимущества метода диагностики с помощью полимеразных реакцийи заключаются в следующем: Прямое обнаружение возбудителей. В отличие от него, метод ИФА дает информацию о присутствии антител к вирусу. Специфичность. То есть копируется именно участок ДНК, который имеется в образце биоматериала. Повышенная чувствительность. Метод может обнаружить даже единичные фрагменты клеток. Диагностика болезней в острой и в скрытой стадии. То есть, можно диагностировать болезнь на этапе доклинических проявлений. У метода есть недостатки, которые приводят к ложным результатам. Самый существенный недостаток — вероятность загрязнения материала. Основным источником загрязнения являются плохо обработанные пробирки, руки лаборанта, реактивы. В кровь может попасть часть ДНК от предыдущей реакции. Поэтому к лабораториям предъявляются повышенные санитарные требования: раздельные помещения, пластиковые пробирки, обработка лабораторий ультрафиолетом и т. д. Ложноотрицательные результаты могут быть следствием сниженной чувствительности реакции. Это происходит в следующих ситуациях: пациент принимает лекарственные препараты, например, антикоагулянты; человек перед анализом перенес физическое напряжение (занятия спортом, тяжелая работа); заражение произошло недавно. Если у пациента есть высокая вероятность инфицирования, а результат исследования отрицательный, ему необходимо повторное обследование. Показания к назначению Частые вопросы Какие анализы нужно сдать для расшифровки наличия гепатита В? Для расшифровки наличия гепатита В необходимо сдать анализы на наличие антигена HbsAg и антител к гепатиту В (анти-HBc IgM, анти-HBc IgG, анти-HBs). Какие значения анализов указывают на наличие гепатита В? Положительный результат анализа на антиген HbsAg и наличие антител IgM к гепатиту В указывают на активную фазу заболевания. Положительный результат анализа на антиген HbsAg и наличие антител IgG к гепатиту В указывают на хроническую форму заболевания. Положительный результат анализа на антитела IgG к гепатиту В без наличия антигена HbsAg указывает на ранее перенесенное заболевание или наличие иммунитета к гепатиту В. Какие анализы помогут определить степень активности гепатита В? Для определения степени активности гепатита В проводят анализы на уровень аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ). Повышенные значения этих ферментов могут указывать на активность воспалительного процесса в печени. Анализ на гепатит Б HBsAg – поверхностный (“австралийский”) антиген вируса гепатита В, основной маркёр острого и хронического процесса. Сдается для первичной диагностики заболевания, по желанию – анонимно, а также в комплексе с анализами на ВИЧ и сифилис. В большинстве случаев HBsAg обнаруживается уже в инкубационном периоде и при остром течении гепатита выявляется в крови в течение 5 – 6 месяцев. Обнаружение поверхностного антигена вируса гепатита В в крови дольше 6 месяцев после начала болезни свидетельствует о возможной хронизации процесса. HBsAg не выявляется при латентных формах. Для уточнения фазы хронического гепатита В проводится определение других маркеров инфекции (ДНК методом ПЦР, HBeAg, анти-HBeAg). Антитела к поверхностному антигену вирусного гепатита Б (Anti-HBs), качественный анализ. Показатель перенесенного гепатита В или иммунитета после вакцинации. После перенесенного острого гепатита В anti-HBs начинают определяться в крови через 2-6 недель после исчезновения HBsAg. Эти антитела являются маркером выздоровления и в большинстве случаев сохраняются пожизненно. Сдать анализ рекомендуется перед проведением вакцинации (в комплексе с определением HBsAg). Антитела к поверхностному антигену вирусного гепатита Б (Anti-HBs), количественный анализ – маркер перенесенного гепатита В или поствакцинального иммунитета. Количественное определение антител к автсралийскому антигену используется для оценки эффективности проведенной вакцинации.ЧТО ОЗНАЧАЮТ РЕЗУЛЬТАТЫ Результат аnti-HBs Интерпретация Рекомендации менее 10 мМЕ/мл Антитела не обнаружены рекомендуется вакцинация/ревакцинация 10-100 мМЕ/мл Низкая концентрация антител пересдача анализа каждые 3-6 месяцев более 100 мМЕ/мл Антитела обнаружены вакцинация рекомендуется не ранее, чем через 8-10 лет HBsAg, количественный анализ – дополнительный критерий для выявления хронического гепатита В и неактивного носительства, а также для оценки эффективности противовирусной терапии. HBeAg – показатель активного размножения вируса. Диагностируется в крови после появления HBsAg. При хроническом HBeAg-позитивном гепатите персистирует в крови длительное время. Этот анализ проводится лицам с положительным результатом определения HBsAg и для оценки эффективности противовирусной терапии.
